Pureza por HPLC: qué significa el porcentaje en un COA
El número que se mira primero en un certificado de análisis (COA) es el porcentaje de pureza. Casi siempre proviene de una prueba llamada HPLC, o cromatografía líquida de alta resolución. Esta guía explica qué mide esa prueba y qué no mide.
Qué hace la HPLC
El laboratorio disuelve una pequeña cantidad de la muestra y la hace pasar a presión por una columna rellena de un material que retiene cada molécula con distinta fuerza. Las moléculas salen de la columna en momentos diferentes y un detector ultravioleta registra cada una como un pico. La gráfica resultante se llama cromatograma.
Cómo se calcula el porcentaje
Cada pico tiene un área. La pureza es el área del pico principal, el compuesto esperado, dividida entre el área total de todos los picos. Si el pico principal representa el 99.1% del área total, el COA informa una pureza del 99.1%.
Qué revisar en el cromatograma
- Un pico dominante. Un lote limpio muestra un pico alto y estrecho, con picos secundarios muy pequeños.
- Tiempo de retención. El minuto en que aparece el pico principal. Debe ser constante entre lotes del mismo compuesto analizados con el mismo método.
- La tabla de picos. Enumera cada pico con su área y su porcentaje. La suma debe ser 100%.
- El método. Columna, fase móvil y longitud de onda del detector. Sin estos datos el resultado no se puede reproducir.
Lo que la HPLC no indica
La pureza por HPLC muestra qué proporción de la muestra corresponde al compuesto principal. Por sí sola no confirma de qué compuesto se trata ni cuánto hay en el vial. La identidad se confirma por espectrometría de masas y la cantidad mediante una prueba de contenido. Por eso un COA completo tiene varios paneles, no uno.
Pureza y cantidad son cosas distintas
Un vial puede tener 99% de pureza y aun así contener menos material del que indica la etiqueta. Verifique que el COA también informe el contenido medido del lote.
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